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细胞培养完整手册

细胞培养完整手册

常用设备

准备室的设备:

单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台。配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、 PH 计(测量培养用液 PH 值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。

培养室的设备:

液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱( -80℃ )、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。

必须放在无菌间的设备:

离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、 CO2 孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、 4℃ 冰箱(放置 serum 和培养用液)。

无菌操作基本技术

无菌室的灭菌:

1.定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用 3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者 0.5 %过氧乙酸擦拭。

2.CO2 孵箱(培养箱)灭菌:先用 3‰ 新洁尔灭擦拭,然后用 75 %酒精擦拭或者 0.5 %过氧乙酸,再用紫外灯照射。

3.实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各 20-30 分钟 。

4.实验后灭菌:用 75 %酒精( 3‰ 新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

5.定期检测下列项目:钢瓶之CO2 压力;CO2培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换);无菌操作台内之airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300 小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。

6.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水。

实验人员的无菌准备:

1.肥皂洗手。

2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋

3.用75 %酒精棉球擦净双手。

无菌操作的演示:

1.凡是带入超净工作台内的酒精、 PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用 75 %酒精擦拭瓶子的外表面

2.靠近酒精灯火焰操作。

3.器皿使用前必须过火灭菌

4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。

5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。

6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。

器械的清洗和消毒

玻璃器械洗消:

一、新的玻璃器皿的洗消:

1.自来水刷洗,除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入 5 %稀盐酸中 12 小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干: 12 小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘

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